用细胞分离液分离组织中单核细胞方法
 

　　淋巴细胞分离液是一种根据细胞密度差异，借助离心产生的重力加速度，进行细胞的分离纯化的常用试剂。常用的淋巴细胞分离液有Ficoll淋巴细胞分离液、Percoll淋巴细胞分离液。Ficoll与Percoll分离单个核细胞的方法均为密度梯度离心法。淋巴细胞分离液是由聚蔗糖、泛影酸葡甲胺、氢氧化钠等配制成水溶液，经灭菌而成。用于分离全血中淋巴细胞。实验室常用的是用于分离人的淋巴细胞的试剂，如果需要分离其他动物如小鼠的淋巴细胞，也有专门的淋巴细胞分离液。
 

　　用淋巴细胞分离液分离人组织中的单个核细胞方法：

　　1．取外科分离的各种组织，用含1％庆大霉素和1％小牛血清的MEM培养液洗涤组织块，洗去可能的污染物。将组织块置培养皿中，加入约为组织块体积5~10倍的同样MEM培养液。用无菌外科剪刀将组织块剪碎成0.5mm3大小。

　　2．将组织块转移到小培养瓶中，静置片刻，吸去培养液。加入约2倍组织块体积的、滤过除菌的酶溶液。37℃水浴摇床中消化1～2小时，注意组织块的消化程度。

　　3．当组织块消化分散后，用手用力摇晃培养瓶3～5分钟或用大口吸管反复吹打，使细胞团进一步分散。加入30ml上述MEM培养液，终止酶反应。

　　4．让上述悬液通过200目的金属网或尼龙网，分离单个细胞。用上述MEM培养液洗涤细胞3次，每次离心1000×g 10分钟。用1％台盼蓝染色法检测细胞活力并计数细胞。

　　5．如果细胞量较多（>107），应当用上述淋巴细胞分离液分离出单个核细胞，并用含10％小牛血清的细胞培养液将细胞配成适当浓度。