美国程序降温盒采用聚碳酸脂(PC)盒体,蓝色高密度聚乙烯(HDPE)盖,白色高密度聚乙烯(HDPE)管槽,泡沫衬垫。
可实现每分钟1℃降温,大大提高冻存细胞的存活率,从冰箱拿出来后,泡沫内衬及异丙醇也可保证逐步升温,故也可用于细胞复苏。
用之前在盒夹层内注入100%浓度的异丙醇,管槽可放置1-2ml冻存管或储液管18个,同时管槽支架可防止管子与酒精接触,以防由于毛细作用而造成污染,或弄掉标签。
美国程序降温盒的使用注意事项如下:
经验1:美国程序降温盒外表面有刻度的吧,异丙醇液面要高于底线。
美国程序降温盒肯定是先放在室温,然后放进去细胞,置于-80,利用异丙醇实现梯度降温啊。
根据论坛里的讨论,异丙醇使用过一段时间后是要更换的,但是我一直没换过,也没发现很大问题。
经验2:我们实验室美国程序降温盒平时放4度,需要冻细胞时直接拿出来用就可以了。第二天转移至液氮,贵重的细胞尽快转移,不然会影响复苏成活率的。一般是用5次就更换一下异丙醇。现在也有一些商品化冻存液可以直接丢进-80的,很方便,效果也不错的。
经验3:异丙醇的量是要保证的,不能低于表明的线,否则不能起到很好的程序性降温作用,我们是在4度放置,放了细胞后立马放到-80度冰箱,第二天再转移到液氮,效果很不错。异丙醇熔点:-87.9度的色透明具有乙醇气味的可燃性有毒液体。注意了有可燃性!急性毒性:口服-大鼠LD50:5840毫克/公斤;口服-小鼠LC50:3600毫克/公斤。刺激数据:眼睛-兔子100毫克/!请注意清理!
经验4:应该不可以把美国程序降温盒放4°的,因为梯度降温的起始点是室温20°左右,所以从-80℃拿出来的美国程序降温盒应该现在室温静置一段时间待其恢复到室温再使用。而其中的异丙醇应使用6~7此后更换一次,而且保证液体量达到刻度线,否则降温效果会受到影响。
经验5:美国程序降温盒里的异丙醇一般是250ml,低于刻度了要加上,理论上是5次以后更换异丙醇,但是异丙醇对环境有害,我们可以多用几次,只是少了的时候要加满。还有冻存液里面的DMSO对细胞有毒性,尤其是室温的时候,所以美国程序降温盒和冻存液先放4°,等把细胞用冻存液重悬好了放在美国程序降温盒里,还放回4°,等到出细胞间的时候再拿到-80°里面保存。过夜再转入液氮。