葡聚糖凝胶(G-15)吸水率是1.5mL/g干胶,葡聚糖凝胶是一种珠状的凝胶,含有大量的羟基,很容易在水中和电解质溶液中溶胀;G型的葡聚糖凝胶有各种不同的交联度,因此它们的溶胀度和分级分离范围也有所不同;葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。
葡聚糖凝胶(G-15)操作步骤:
1、毫升蒸馏水,搅拌均匀,在室温溶胀6小时,或沸水浴溶胀2小时,一般采用后一种方法;再用倾泻法除去凝胶上层水及细小颗粒,用蒸馏水反复洗涤几次,再以缓冲溶液(pH7.0的Tris—醋酸溶液)洗涤2—3次,使pH和离子强度达到平衡,zui后抽去溶液及凝胶颗粒内部气泡,凝胶可保存在缓冲液内。
2.装柱:将层析柱洗净,垂直固定在铁支架上,选择有薄膜端作为层析柱下口,将下口凝胶表面平齐时,关闭下端出口。
3、用少量洗脱液清洗层析柱加样区,共洗涤三次,每次清洗液应*进入凝胶柱内后,再进行下一次洗涤;zui后在凝胶表面上加入洗脱液,保持高度为3—4cm。
4、洗脱与收集:连接好凝胶柱层析系统,调节洗脱液流速为每分钟1毫升,进行洗脱;仔细观察样品在层析柱内的分离现象,收集洗脱液,每收集3毫升即换一支收集管(试管预先编号),收集约20管左右,样品即可*被洗脱下来;将各收集管中的洗脱液分别用721型分光光度计在波长540nm处测定其光密度。
5、凝胶回收处理方法:将样品*洗脱下来后,继续用三倍柱床体积的洗脱液冲洗凝胶后,将柱下口放在小烧杯中,慢慢打开,再将上口慢慢松开,使凝胶全部回收至小烧杯中,备用。