CCK-8试剂盒是一种敏感性高、特异性强、重复性好的试剂盒,其试剂安稳、易保留、操作简练、作用区分客观等要素,适宜于大规模筛查实验又能够用于少数标本的检查,能够做定性实验也能够做定量分析。
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的人心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
CCK-8试剂盒的实验小贴士:
1、在收到试剂盒后,为保证检测效果,需要根据说明书中保存条件正确储存。除非特别注明,试剂盒大多是在2~8°C条件下储存;
2、在实验进行前,请确认包装中的试剂盒成分与说明书一致,再进行后续操作;
3、溶解标准品过程中,注意标准品是否受潮,过程中要避免产生泡沫;
4、为了避免交叉污染,配置不同浓度标准品、上样、加不同试剂都需要更换枪头。另外不同试剂请分别使用不同的移液槽;
5、每次孵育时,正确使用封板胶纸可保证结果的准确性;
6、正确洗板有助于实验结果的稳定性;
7、TMB显色底物在上板前应为无色,请避光保存。加入孔板后,将由无色变成不同程度的蓝色;
8、终止液上板顺序需与底物上板顺序一致,加入终止液,溶液颜色由蓝色变为黄色。如果出现绿色,即表明终止液与底物未混匀,请充分混合。