在CCK-8试剂盒中一般有两次抗原抗体反响，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反响的完结需求有一定的温度，这一保温进程称为温育，有人称之为孵育，在本产品中似不恰当。

　　保温的方法除有的附有特制的电热块外，一般均选用水浴，可将其置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度敏捷平衡。为防止蒸腾，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此刻可让反响板漂浮在水面上。若用保温箱，本产品应放在湿盒内，湿盒要选用传热性杰出的资料如金属等，在盒底垫湿的纱布，终将ELISA板放在湿纱布上。

　　CCK-8试剂盒步骤：

　　1、从室温平衡20分钟后的铝箔袋中取出所需酶标板孔数目，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

　　2、标准品和样本加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL，空白孔不加。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3、加酶：标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔。

　　4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育60分钟。

　　5、配液：将20X浓缩洗涤液用蒸馏水稀释20倍后备用。

　　6、洗涤：小心揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次。

　　7、显色：每孔加入底物A、B各50μL，轻轻震荡混匀后，37℃避光孵育15min。

　　8、终止：每孔加入终止液50μL，终止反应，此时蓝色立刻转为黄色。

　　9、测定：以空白孔调零，15分钟内在450nm波长处测定各孔的吸光度（OD值）。