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葡萄糖-6-磷酸脱氢酶
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更新时间:2018-03-10  |  阅读:1962

详情介绍

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易微板法)

 

产品简介:

 

葡糖-6-磷酸脱氢酶( glucose 6-phosphatedehydrogenaseG-6-PD  G6PD)是糖酵解途径、檬酸循以外的另一个葡萄糖分解途径的磷酸葡萄糖酸途径(磷酸戊糖途径)

 

的*个(EC1.1.1.49)

 

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂(易比色法)检测原理是红细 G-6-PD 催化葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-,后者快氧化成 6-磷酸葡萄糖酸(6-PGA),同 NAPD 原成 NADPH,其反公式如下:

 

G-6-P+NAPD+  6-PGA+L-NADPH

 

在上述偶中,NADPH 生成速率本中活性呈正比,通过酶标仪或自分析

 

 340nm 处检测吸光度升高速率( A/min),升高速率( A/min) G-6-PD 活性呈正,直接的活性位。100T 该试剂试剂可以检测 50 本,该试剂用于科研

 

域,宜用于断或其他用途。

 

产品组成:

 

 

 

 

试剂(A): 本稀

30ml

-20℃ 避光

试剂(B): G6PD assay buffer

30ml

4℃

试剂(C): NADP

9mg

-20℃

试剂(D): G-6-P

1

-20℃

试剂(E): G-6-P

10ml

RT

 

 

 

 

自备材料:

 

1、生理

 

2、水浴

 

396 孔板

 

4酶标仪

 

 

操作步骤(供参考)

 

1、准溶血液:取新抗凝血,离心取上清及白,用 4℃冷的生理水洗 2 次,

 

次取上清必去除剩余的白,再加冷的生理水配成含红细压积为

 

 

 

30%红细液,4℃保存用。用前,以本稀液稀 25 倍,即溶血液。4℃

 

保存 10h-20℃保存 48h

 

2、配制 NADP 存液:取 9mg NADP 溶解于 1ml G6PD assay buffer,充分混匀,配制

 

 NADP 存液(9mg/ml)-20℃保存用。

 

3、配制检测工作液:取 NADP 存液和 G6PD assay buffer,按 NADP 存液(9mg/ml)

 

G6PD assay buffer=149 的比例混合,即为检测工作液。-20℃保存,一个月有效。4、配制 G-6-P 工作液:取 G-6-P 1 支溶解于 G-6-P  10ml,混匀,即 G-6-P

 

作液,分装成小份后,-20℃保存用。

 

5、分光光度计检测:按照下表置空白管、定管,溶液按照序依次加入,并注意避免生气泡。如果品中的活性高,可以减少品用量或适当稀后再定。

 

加入物

空白管

定管

检测工作液(μl)(37℃)

220

220

G6PD assay buffer (μl)

5

溶血液(μl)

5

混匀,37℃孵育 10min

 

G-6-P 工作液(μl)

25

25

 

混匀,37℃孵育 60s,在 340nm  1-3min 各管吸光度

 

化,算各管  A/min

 

6、生化分析仪检测:按照下表置主要参数。如果品中的活性高,可以减少品用

 

量或适当稀后再定。

 

340nm

温度

37℃

孵育时间

90s

连续监测时间

60s

比色杯光径

1.0cm

系数

8040

测样

6μl

检测工作液

264μl

G-6-P 工作液

33μl

 

 

计算:

 

6

   分光光度计计算公式:G6PD(U/L)= A/min×(10 /6220)×(250/5)= A/min×8040

式中:6220=NADH 的吸光度250=液的(μl) 5=测样品体(μl)

 

 

生化分析仪计算公式:G6PD(U/L)= A/min×(10 /6220)×(303/6)= A/min×8040

 

6

 

式中:  A/min=定的 340nm 吸光度的升高速率

 

6220=NADH 的吸光度303=液的(μl) 6=测样品体(μl)

 

参考范围:

 

成年健康人红细 G6PD8-18U/g Hb

 

 

注意事项:

 

1、 血清中 G6PD 活性在室温可以保存 2 天,4℃保存 1 周,-20℃保存 1 个月。

 

2 重黄疸、脂血或溶血的血清,可能会引起定管吸光度增高。

 

3 了您的安全和健康,穿实验服并戴一次性手套操作。

 

有效期:6 个月有效。

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