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细胞生长曲线的测定实验目的:
掌握绘制细胞生长曲线的原理和方法。
细胞生长曲线的测定背景与原理:
生长曲线是测定细胞生长数的常用方法,也是判定细胞活力的重要指标,是培养细胞生物学特性的基本参数之一。--般细胞传代之后,经过短暂的悬浮后贴壁,随后渡过长短不同的潜伏期,即进入快速生长的指数生长期。在细胞达到饱和密度后,停止生长,进入平台期,然后退化衰亡。为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化,需连续对细胞进行计数。通常计数6天。为精确起见,一般每次实验设3个平行重复。
[材料、试剂与仪器]
1、实验材料:
Hela细胞系。
2、实验试剂:
DMEM培养基(青霉素,链霉素,10%血清) ,0.25%胰蛋白酶溶液, 台酚蓝染液。
3、实验仪器:
超净工作台,CO2培养箱,倒置显微镜,微量移液器,血细胞计数板,培养瓶,离心管,移液管,废液缸,盖玻片, 24孔板。
[方法与步骤]
1、取生长良好的细胞,用培养基制成细胞悬液后计数。根据细胞计数结果按5x104/mL作传代培养接种于24孔板中,共接种21孔细胞。1 m/孔。余下三孔可设传代培养的对照。
2、24h后每天记录细胞数目,每次取3孔细胞,分别进行计数。计算平均值。连续计数7d。细胞用胰酶消化后加入一定量的培养基,混匀制成细胞悬液。取少量悬液与台酚蓝1:1混台。取一干净的血细胞计数板,盖上盖片,从盖片两边滴入细胞悬液使之充满计数板和盖片之间。注意滴液勿有气泡,也不能太多,否则会使盖片浮起而使细胞计数不准。
3、低倍镜下观察,活细胞不着色,台盼蓝着色的细胞呈深蓝色,是不健康或已死亡的细胞,不能计数。
找出计数板上的方格,计算四角大格内总细胞数,大格线者只计左侧和上方,不计右侧和下方细胞悬液中细胞
密度计算公式为:细胞数/mL= (四角大格内细胞数/4) x104x2
4、根据细胞计数结果,以单位细胞数(细胞数/mL)为纵坐标,以时间为横坐标绘制生长曲线。
部分实验代做服务
ELISA试剂盒免费代检测 | CCK8检测 | 基因组DNA提取
| 蛋白相互作用分析 |
Western Blot
| 免疫组化 | 荧光定量PCR | 动物模型服务 |
流式细胞检测 | 细胞增殖 | 激光共聚焦 | DNA甲基化实验 |
细胞划痕 | 钙离子浓度检测 | 扫描电镜实验 | microRNA 测序 |
动物实验 | Taqman探针 | ATP/ADP检测
| 石蜡/冰冻切片 |
定点突变 | 线粒体膜电位(MMP)检测 | 细胞生长曲线的测定 | 药理毒理动物实验
|
免疫共沉淀 | 真核表达载体构建 | 染色质免疫沉淀CHIP | 非标定量(Label-free)实验 |