详情介绍
DIGE技术实验服务
实验技术简介:
DIGE一双向荧光差异凝胶电泳(Two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis ,2D-DIGE),是在传统双向电泳的基础上发展而来的新型蛋白质组学定量技术,其分离蛋白质混合的原理与双
向电泳是一致的, 主要利用蛋白质的等电点和分子量的差异来分离蛋白质混合物,同时应用荧光染料的灵敏度及内标的使用等技术,使其在定量蛋白质组学的研究中效果明显优于传统双向电泳。DIGE使用的荧光染料有Cy2, Cy3和Cy5,它们能与蛋白质的赖氨酸侧链氨基反应而使蛋白质被标记,被标记蛋白质的等电点和分子量几乎不受影响,等量混合标记好的蛋白质后进行双向电泳,不同凝胶之间可以
通过cy2内标匹配,消除凝胶之间的差异,蛋白质表达量的变化则通过cy3和cy5不同荧光的强度来体现。
与常规双向电泳后,银染或考染胶相比,DIGE具有以下优势:
1、灵敏度高,低可检测到125pg的蛋白质;
2、高效性,同一块凝胶上可以电泳两个样品,减轻了工作量;
3、线性范围更广,动态范围高达10-5;
4、定量精确,采用内标消除了凝胶与凝胶之间的实验误差,显著提高了实验的精确度和可重复性;
5、统计学分析,ImageMaster7.0 (DIGE) 软件可以得到统计学可信的结果,降低了操作者之间的偏差。
DIGE技术服务流程
DIGE技术服务内容
1、样本制备与定量; .
2、荧光标记;
3、双向电泳和图片分析;
4、DIGE实验报告提交。
送样须知:
1、技术咨询:在您开展实验之前,本公司将为您竭诚提供有效的DIGE实验设计方案。
2、为了保证DIGE实验能顺利进行,样品须液氮或干冰保存寄送,
注:样本应避免各类污染和反复冻融。
实验报告内:
1、DIGE荧光电子图片;
2、蛋白质点定量分析结果,包括差异点号码、差异倍数、pI和MW等;
3、完整实验报告,包括实验步骤、使用仪器、软件检索参数等。
实验代做服务:
ELISA试剂盒免费代检测 | CCK8检测 | 基因组DNA提取
| 蛋白相互作用分析 |
Western Blot
| 免疫组化 | 荧光定量PCR | 动物模型服务 |
流式细胞检测 | 细胞增殖 | 激光共聚焦 | DNA甲基化实验 |
细胞划痕 | 钙离子浓度检测 | 扫描电镜实验 | microRNA 测序 |
动物实验 | Taqman探针 | ATP/ADP检测
| 石蜡/冰冻切片 |
定点突变 | 线粒体膜电位(MMP)检测 | 细胞生长曲线的测定 | 药理毒理动物实验
|
免疫共沉淀 | 真核表达载体构建 | 染色质免疫沉淀CHIP | 非标定量(Label-free)实验 |