详情介绍
实验意义
1.可应用于阐明基因组结构与功能以及基因之间相互作用的科学,对于探索基因在生命活动中的作用及其机制具有重要意义。
2.能够为一些疾病提供新的诊断方法和治疗方法,可有助于医生获得更多治疗信息并进行个性化精准医疗。
实验原理及步骤
1. siRNA的设计和选择:根据研究目的选择合适的数据库及软件筛选靶序列的siRNA,通常需要设计多个siRNA,找到zui you zui有效的siRNA序列;
2. siRNA的制备:常用的体外制备方法有化学合成、体外转录、长片段dsRNA经RNase Il类降解,以及通过siRNA表达质粒载体或者病毒载体以及PCR制备的siRNA表达框架(siRNA expression cassettes, SECs)在细胞中表达制备siRNA;
3. siRNA的转染: siRNA. siRNA表达载体或者siRNA表达框架转染进入细胞的方法主要有磷酸钙共沉淀转染、电穿孔转染机械法(显微注射和基因枪) . 阳离子脂质体试剂转染;
4.检测靶基因的表达: WB等方法检测靶基因的表达或者可以通过标记siRNA(如荧光标记)分析其表达,还可用作siRNA胞内定位和双标记实验来追踪转染过程以及靶基因表达沉默过程。
实验周期及交付标准
1.实验周期: 2-4周
2.交付标准:质粒、片段验证结果、实验报告(实验步骤.试剂、仪器等)
需确认的信息
1.基因的种属及ID号
2.基因序列
实验代做服务:
ELISA试剂盒免费代检测 | CCK8检测 | 基因组DNA提取
| 蛋白相互作用分析 |
Western Blot
| 免疫组化 | 荧光定量PCR | 动物模型服务 |
流式细胞检测 | 细胞增殖 | 激光共聚焦 | DNA甲基化实验 |
细胞划痕 | 钙离子浓度检测 | 扫描电镜实验 | microRNA 测序 |
动物实验 | Taqman探针 | ATP/ADP检测
| 石蜡/冰冻切片 |
定点突变 | 线粒体膜电位(MMP)检测 | 细胞生长曲线的测定 | 药理毒理动物实验
|
免疫共沉淀 | 真核表达载体构建 | 染色质免疫沉淀CHIP | 非标定量(Label-free)实验 |