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细胞周期实验服务
细胞周期的检测
“细胞周期“也称细胞分裂周期”,是指一 个细胞经生长、分裂而增殖成两个所经历的全过程,通常可分为若干阶段,即G1期、S期、G2期和M期。细胞在G1期完成必要的生长和物质准备,在S期完成其遗传物质一染色体DNA的复制, 在G2期进行必要的检查及修复以保证DNA复制的准确性,然后在M期完成遗传物质到子细胞中的均等分配,并使细胞一分为二。
细胞周期检测手段
1.细胞计数法;
2. BrdU渗入法;
3.流式细胞术测定法(PI染色法) ;
4.同位素标记法(标记有丝分裂百分率) ;
5.免疫荧光染色[p27K-和hCdt1(30/120)等。
与细胞周期相关常见疾病
白血病(白血病的病因之-可能是造血干细胞不能正常分裂,丧失造血功能所导致的)肾病(很多肾脏疾病,特别是那些有炎症反应的肾小球病变与肾小管间质病变,都伴有明显的细胞数量增多。肾小球与肾小
管间质细胞的增生进而又促进)皮肤病(皮肤细胞非正常增生引起)
参与细胞周期调控的几种蛋白
1.周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK) : CDC2与细胞周期蛋白结合才具有激酶的活性,故名细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase, CDK)。
2.周期蛋白(Cyclin) :参与细胞周期调控的蛋白,并且其浓度在细胞周期中是浮动的呈周期性变化。随着细胞周期阶段的不同,有时浓度高达几千倍,有时又降为季。周期蛋白作为一种调节亚基,与周期蛋白依赖性的蛋白激酶结合并将之激活
3.周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制因子(CKI) :能够与周期蛋白依赖性激酶结台并抑制其活性的蛋白质。在哺孚动物中分为两个家族即CIPKIP和INK4家族。
不同类型的CDK/cyclin复合体
激酶复合体 | 脊椎动物 | 芽殖酵母 | ||
Cyalin | CDK | Cyclin | CDK | |
G1-CDK | Cyclin D* | CDK4、6 | CIn 3 | CDK1(CDC28) |
G/S-CDK | Cyclin E | CDK2 | CIn 1.2 | CDK1(CDC28) |
S-CDK | Cyclin A | CDK2 | CIb 5.6 | CDK1(CDC28) |
M-CDK | Cyclin B | CDK1(CDC2) | CIb 1-4 | CDK1(CDC28) |
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| 蛋白相互作用分析 |
免疫组化 | CCK8检测 | 荧光定量PCR | 动物模型服务 |
流式细胞检测 | 细胞增殖 | 激光共聚焦 | DNA甲基化实验 |
细胞划痕 | 钙离子浓度检测 | 扫描电镜实验 | microRNA 测序 |
动物实验 | Taqman探针 | ATP/ADP检测
| 石蜡/冰冻切片 |
定点突变 | 线粒体膜电位(MMP)检测 | 细胞生长曲线的测定 | 药理毒理动物实验
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免疫共沉淀 | 真核表达载体构建 | 染色质免疫沉淀CHIP | 非标定量(Label-free)实验 |