PCR 产物纯化回收试剂盒

quick Midi Purification Kit

保存条件：本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。产品介绍：

在高离序盐存在的情况下，DNA 片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除，最后低盐、高 pH 值的洗脱缓冲液将纯净 DNA 从硅基质膜上洗脱。

产品特点：

1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2. 使用了优质结合液，不含传统结合液的碘化那钠和高氯酸盐，不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。

3. 结合液调制成为了黄颜色，便于监测 pH 值变化从而达到较理想结合效果，大大提高回收效率。

4. 简单快速、使用方便。

注意事项:

1. 所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在 37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清,使用前应该恢复到室温.

2. 储存于低温（4℃或者-20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果。

3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

4. 结合液中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。

5. 回收纯化的 DNA 片段一般在 100bp 到 40kb 之间，过长、过短片段的回收效率迅速降低。

6. 回收 DNA 的量和起始 DNA 的量，洗脱体积，DNA 片断大小有关。一般 1-20μg， 100bp-5kb 的DNA 片段，回收率可达 95%。

7. pH 值≤7.5 时，吸附膜吸附 DNA 的效率最高。如果待纯化产物含有碱性物质过多，造成和结合液混和后pH 偏高，会导致回收率降低。混和后，如果结合液依旧保持黄色，说明 pH 正常；如果变成橘红色或者淡紫色，说明 pH 偏高，可加 5-10μl 3M 醋酸钠（pH5.2）将 pH 值调到 5-7（黄色）。

• 洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA， 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱， 但应该确保 pH 大于 7.5pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱，DNA 片段应该保存在-20℃。DNA 片段如果需要长期保存，可以用 TE 缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是 EDTA 可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。
• 自备试剂：无水乙醇
• 操作步骤：

提示：*次使用前请先在漂洗液 WB 中加入量无水乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!

1. 每 100μl PCR 扩增后体系或者酶切后体系加入 500μl 结合液 BB，充分混匀。（如果初始体系小于 100μl，请事先用双蒸水调整至100μl）。

2. 将上一步所得溶液加入吸附柱 EC 中（吸附柱放入收集管中），室温放置 1min，12,000rpm 离心 30-60sec，倒掉收集管中的废液。

3. 加入 500μl 漂洗液 WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm  离心 30sec，弃掉废液。

4. 重复操作步骤 3。

5. 将吸附柱 EC 放回空收集管中，12,000rpm 离心 2min，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

6. 取出吸附柱 EC，放入一个干净的离心管中，室温放置数分钟。

7. 在吸附膜的中间部位滴加洗脱缓冲液 EB（洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中加热效果更好），室温放置 2min，12,000rpm  离心1min。如果需要较多量 DNA，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，离心 1min。(注意:洗脱体积越大，洗脱效率越高。如果需要

DNA 浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于 30μl，体积过小降 DNA 洗脱效率，减少产量。)