实验意义

荧光定量PCR (Realtime fluorescence quantitative PCR, qPCR)也称作实时荧光定量PCR。就是在PCR的扩增过程中，通过荧光的信号，对PCR的进程进行实时的定性、定量检测， 后通过标准曲线对初始模板进行定量分析的方法。

检测方式有SYBR Green染料法和Taqman探针法两种方式。

探针法与染料法的优缺点

1.探针法通过探针可以增加反应收集信号的特异性，只有探针结合的片段上发生扩增才能收集到信号，能够用多重体系反应的方法，能够预测和提前进行反应条件的优化,缺点是要合成探针，成本高，周期长。

2.染料法经济实惠，可以做溶解曲线，分析全部PCR产物的TM值，缺点就是特异性没有探针法好。

实验标本收集及保存方法：

1：病理标本收集及保存：

1）冰冻切片：取下适当的组织块放于液氮保存；  

2）石蜡切片：取下适当的组织块放于4%多聚甲醛保存；

3）细胞爬片：细胞爬片4%多聚甲醛固定30min，换PBS浸没4℃保存。

2：分子生物学标本收集及保存：

1）新鲜组织：切割标本后放于液氮或者-80℃冰箱保存；            

2）石蜡标本：常温保存；

3）全血标本：取适量全血加入EDTA或肝素抗凝采血管；          

4）体液标本：高速离心取沉淀；

5）细胞标本：细胞加TRizol裂解后液氮或者-80℃冰箱保存。

3：蛋白质实验标本收集及保存：

1）新鲜组织：切割标本后放于液氮或者-80℃冰箱保存；    

2）全血标本：取适量全血加入EDTA或肝素抗凝采血管；      

3）细胞标本：细胞加细胞裂解液充分裂解后液氮或者-80℃冰箱保存。

4：ELISA、放免、生化实验标本收集及保存：

   1）血清（血浆）样本：取全血加入促凝管（抗凝管），2500转离心20分钟左右，收集上清，液氮或者-80℃冰箱保存；

   2）尿液样本：样本2500转离心20分钟左右，液氮或者-80℃冰箱保存；胸腹水、脑脊液、肺泡灌洗液参照此实行；

3）细胞样本：检测分泌性的成份时，样本2500转离心20分钟左右，液氮或者-80℃冰箱保存；检测细胞内的成份时，用PBS稀释细胞悬液，通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份，2500转离心20分钟左右，收集上清同上；

4）组织样本：切割标本后，称取重量，用液氮或者-80℃冰箱冷冻保存备用。

5：代谢组学标本收集：

   1）尿液样本：样本2500转离心20分钟左右，液氮或者-80℃冰箱保存；胸腹水、脑脊液、肺泡灌洗液等参照此实行；

   2）组织样本切割标本后，称取重量，用液氮或者-80℃冰箱冷冻保存备用；

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